practica 7 tincion de gram

TINCION DE GRAM

Una ves puesto el campo de esterilizacion, se fue entregando el frotis ya antes realizado, ahora tubimos que colocar la preparacion fijada con la solucion de cristal violeta durante 1m, despues lo dejamos escurrir y luego lo metemos en yodo durante 1m, despues que haya pasado el minuto lo lavamos con algo y se mete en la otra solucion durante 30 seg, una ves echo eso lo dejamos secar y le ponemos una gota de aceite de inmersión.y por ultimo lo observamos por el microscopio con el objetivo 100 x

practica 6 frotis

FROTIS
Con el asa bactereologica se va a desarrollar un frotis en un portaobjetos de cristal.
Se toma el asa bactereologica se pone en la flama del mechero dejandola al rojo vivo para que se esterilize, se retira del fuego se toma una pequeña gota de agua destilada, con ella misma se extrae una muestra del material bactereologico que crecio en las cajas petri.
una vez teniendo ese material en el asa de acude a ponerlo en el portaobjetos en la parte central desplazando de izquierda a derecha el material bactereologico hasta que nos quede delgada, una vez teniendola verificamos si ya esta lista para el frotis de la muestra del cultivo.
ya realizado el frotis se fija de forma directa, se toma el porta de sus partes laterales a lo largo para su transporte.
Por ultimo, se toma el porta de forma lateral para pasarlo por la flama nunca se debe dejar de forma directa en la flama.una vez fijado el frotis queda listo para el proceso de tincion.

practica 4

TIPOS DE SIEMBRAS EN MEDIOS DE CULTIVO : Cultivo en medio líquido Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede Cultivo en medio líquido Habitualmente sCultivo en medio líquido Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.Cultivo en medio sólido Puede ser en tubos o placas.a) Tubos con agar inclinado.Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.b) Tubos sin inclinar.Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.c) Siembra en placas.Puede ser en superficie o incorporada.En superficie:1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante.3) Se siembra con un hisopo.IncorporadaSe coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estérilCultivo en medio líquido Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.Cultivo en medio sólido Puede ser en tubos o placas.a) Tubos con agar inclinado.Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.b) Tubos sin inclinar.Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.c) Siembra en placas.Puede ser en superficie o incorporada.En superficie:1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante.3) Se siembra con un hisopo.IncorporadaSe coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estérilCultivo en medio líquido Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.Cultivo en medio sólido Puede ser en tubos o placas.a) Tubos con agar inclinado.Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.b) Tubos sin inclinar.Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.c) Siembra en placas.Puede ser en superficie o incorporada.En superficie:1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante.3) Se siembra con un hisopo.IncorporadaSe coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estérile realiza en tubos o en matraces. El crecimiento se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.Cultivo en medio sólido Puede ser en tubos o placas.a) Tubos con agar inclinado.Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.b) Tubos sin inclinar.Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.c) Siembra en placas.Puede ser en superficie o incorporada.En superficie:1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante.3) Se siembra con un hisopo.IncorporadaSe coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estérilmanifestar por enturbiamiento, por formación de velo o película, o por sedimento.Cultivo en medio sólido Puede ser en tubos o placas.a) Tubos con agar inclinado.Para sembrarlos, se mueve el ansa o la punta suavemente sobre la superficie del agar con un movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.b) Tubos sin inclinar.Se siembran introduciendo una punta en el centro del agar. También se llama siembra por picadura.c) Siembra en placas.Puede ser en superficie o incorporada.En superficie:1) Se colocan 0.1 mL de la dilución de la muestra con pipeta estéril en el centro de la placa, y se distribuye con un rastrillo estéril.2) Se siembra con un ansa para aislar, como se explica más adelante.3) Se siembra con un hisopo.IncorporadaSe coloca 1 mL de la muestra en una placa estéril vacía, en el centro de la misma. Sobre ella se agregan 20 mL de medio de cultivo fundido y termostatizado a 45ºC; luego se agita la placa, moviéndola 4 veces en sentido horario, 4 en sentido antihorario, una vez de arriba a abajo, una vez hacia los costados y una vez en sentido antihorario.Las placas se incuban invertidas, ya que la alta concentración de agua en el medio puede provocar condensación durante la incubación y si cae sobre la superficie del agar, se extiende dando un crecimiento confluente.En medio sólido cada célula viable dará origen a una colonia y por lo tanto la siembra en placas se puede utilizar, no solo para cultivar microorganismos, sino además para contar y aislar.En general cuando se quieren tener colonias aisladas a partir de un material determinado, es necesario diluir la muestra en tubos con suero fisiológico estéril

practica numero 3 tipos de tinciones

TINCION :Mecanismos de Coloración:La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos físicos y químicos de absorción:los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química. Los Colorantes:Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos.Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos. Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido. Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración:Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado. Tinciones:Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.Tipos de Tinción:Tinción Simple: utiliza un solo colorante. Tinción de Gram:Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg) Tinción Ácido Resistente:Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.Tinción de Giensa:El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias núcleos de la células. Tinción de Esporas:Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.Cápsula :Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias. Tinción de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.Endósporas:Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un extremo de la misma.Levaduras:Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente. Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular. Las Cápsulas:Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas especies.Sarcina:Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2.Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula. Bacillus Cereus:La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente.Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos.Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.

practica 2 medios de cultivo

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientesque en concentraciones adecuadas y en condicionesfísicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.Estos medios son esenciales en el Laboratoriode Microbiología por lo que un control en sufabricación, preparación, conservación y uso, asegurala exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de losresultados obtenidos.

Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdoa la naturaleza de sus constituyentes en:

Medios naturales o complejos:

constituidos porsustancias complejas de origen animal o vegetal,las que son usualmente complementadas por laadición de minerales y otras sustancias. En ellosno se conocen todos los componentes ni las cantidadesexactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintéticos:

son los medios que tienen una composición químicadefinida cuali y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos deinvestigación.

De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

Medios de enriquecimiento:

son medios líquidos que favorecen el crecimientode un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número demicroorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustanciasinhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los quese quieren cultivar.

practica numero 1

Practica 1 MEDIO DE CULTIVO
Se debe solicitar en el laboratorio una hoja para anotar los materiales que se utilizaran en la elaboracion de un medio de cultivo.
El alumno debe de tener su equipo de bioseguridad completo.
Vestir la mesa de laboratorio con papel blanco.
Una o dos personas deben rebizar que este activada la linea de gas l.p. conectar los mecheros y abrir las balbulas. Habilitar el equipo de esterilización "autoclave" en el cual se debe introducir agua destilada para llevar a cabo la esterilizacion por calor humedo.
Se debe pesar en la balanza granataria el contenido en gramos dependiendo de las cajs petri solicitadas siguiendo las indicaciones que contiene el medio. SE ocupa rehidratar el contenido del polvo para las 5 o 7 cajas y este se mezclara en el contenido de agua destilada que se requiera para las cajas solicitadas. El polvo se mezclara con agua en el vaso de precipitado para mezclar se utilizara una varilla de cristal como agitador cuidando que no se tengan grumos en el vaso.
SE deben llevar los tiempos de trabajo y acomodarlos en un formato como bitacora.
Una vez reposado el medio de cultivo se expone al fuego del mecher hasta dejar que se presente la ebullicion.
Una vez que se presento la ebullicion se deja enfriar y reposar para taponear y colocarlo en la autoclave.
Aplicar tecnica de esterilizacion.

FROTIS

frotis
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.
Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.
La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.
Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua.
Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.